酶免疫測定法（Enzyme Immunoassay，簡稱EIA）是一種將酶的催化功能與抗原-抗體反應(yīng)相結(jié)合的免疫學(xué)測定技術(shù)。EIA常用的方法又包括酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）、酶免疫組化法（IHC），前者測定可溶性抗原和抗體，后者測定組織中或細(xì)胞表面的抗原。該方法利用酶作為標(biāo)記物，最終形成酶標(biāo)記抗原抗體復(fù)合物，從而實現(xiàn)對目標(biāo)分子的定性和定量分析。酶免分析免疫試劑具有檢測靈敏度高、特異性好、重復(fù)性高等優(yōu)點(diǎn)。酶免疫分析試劑在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境和食品檢測等多個領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。其應(yīng)用前景廣闊，特別是在臨床醫(yī)學(xué)診斷、食品安全性檢測以及環(huán)境。

酶免分析免疫試劑所需原料主要包括抗原、抗體、酶標(biāo)記劑、控制品、基質(zhì)和微孔板等。其中，抗原和抗體是酶免分析免疫試劑的核心原料，主要用于形成酶-抗體或酶-抗原復(fù)合物來檢測樣品中的分子。酶標(biāo)記劑是將特異性抗體與酶進(jìn)行反應(yīng)生成的復(fù)合物。常見的酶標(biāo)記劑有過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）等?？刂破酚糜诖_定酶免分析免疫試劑測定的準(zhǔn)確性和可行性。基質(zhì)是顯色底物和停止底物的混合物。

堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AP)是一種膜結(jié)合糖蛋白。AP在自然界中廣泛分布，包括原核生物和更高的真核生物。其活性位點(diǎn)中包括兩個鋅離子和一個鎂離子，這三個位點(diǎn)的金屬離子對于酶活性至關(guān)重要。堿性磷酸酶可以水解各種單磷酸酯，并釋放無機(jī)磷酸鹽。1,2-二氧雜環(huán)丁烷化合物AMPPD作為一種超靈敏的堿性磷酸酶底物，在堿性磷酸酶的催化作用下，磷酸根基團(tuán)水解，形成一個不穩(wěn)定的中間體，自行分解后四元環(huán)斷裂釋放出大量能量，從而激發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。因此磁珠-抗體偶聯(lián)物與堿性磷酸酶-抗體偶聯(lián)物在化學(xué)發(fā)光試劑盒中可作為固相捕獲試劑和酶標(biāo)試劑用于檢測血清中的痕量抗原。與辣根過氧化物酶(HRP)相比，堿性磷酸酶具有穩(wěn)定性和高敏感性的優(yōu)勢。AP在生物學(xué)尤其是分子生物學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。

辣根過氧化物酶，簡稱HRP，HRP是一種單鏈多肽，含有4個二硫橋。它是一種糖蛋白，含有18％的碳水化合物。該碳水化合物組成包括半乳糖，阿拉伯糖，木糖，巖藻糖，甘露糖，甘露糖胺，半乳糖胺，這取決于特定的同功酶。 它的分子量（44 kDa）包括分子量（33,890道爾頓）的多肽鏈，血紅素加Ca2 +（700道爾頓），碳水化合物（約9,400道爾頓）。有7種HRP的同工酶存在。辣根過氧化物酶的等電點(diǎn)范圍從3.0 - 9.0。辣根過氧化物酶是目前使用廣泛的一種標(biāo)記酶，用來標(biāo)記抗體或其它蛋白質(zhì)，既能用于定位檢測，也能用于定量測定。 辣根過氧化物酶（HRP）的從辣根根（Amoracia RUSTICANA）中分離。它是用于生物化學(xué)中的應(yīng)用，如western印跡，ELISA和免疫組化。辣根過氧化物酶是用來放大弱信號，增加被探測的目標(biāo)分子，如蛋白質(zhì)。它通常被用于確定葡萄糖和溶液中的過氧化物的量。它也被用于在煙曲霉快速藥敏測定。

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